一、
Elisa試劑盒的關鍵之處:
1、實驗的原理似乎很簡單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個實驗。
2、在實驗結(jié)束時,我們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。背景噪音會影響您對結(jié)果的判斷。
3、洗滌很重要:洗滌步驟看似很無聊,其實很重要,因為如果未結(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。
4、如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會阻止非特異結(jié)合反應。如果背景過高,而您懷疑洗滌不夠時,可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
5、Elisa試劑盒封閉更關鍵:封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機會。
6、您當然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當延長封閉時間。
7、如果您一直被背景問題所困擾,那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間,但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。
8、好的封閉液應降低非特異性結(jié)合,但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。
9、蛋白封閉液則有所不同,是的。它們與開放位點結(jié)合并封閉,同時穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。
10、血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。
總結(jié):Elisa試劑盒的實驗原理關鍵之處小編就分享到這了,看完本文您就應該有了基本的認識和了解相信大家都明白了吧!總的來說,希望對大家有所幫助。