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ATP 含量測試盒的測定原理

更新時(shí)間:2023-11-22      瀏覽次數(shù):385

ATP 含量測試盒的測定原理

(100 管/48 樣)

一、檢測意義:

三磷酸腺苷(adenosine 5'-triphosphate,ATP)是生物體內(nèi)能量轉(zhuǎn)換最基本的載體, 其含量的變化直接關(guān)系到各器官的能量代謝。ATP 作為最重要的能量分子在細(xì)胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP 水平的改變,會(huì)影響許多細(xì)胞的功能。通常細(xì)胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態(tài)下,ATP 水平會(huì)下降,而高葡萄糖刺激等對(duì)于一些細(xì)胞可以上調(diào)細(xì)胞內(nèi) ATP 水平。通常ATP 水平的下降表明線粒體的功能受損或下降,在細(xì)胞凋亡時(shí) ATP 水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時(shí)發(fā)生狀態(tài)。ATP 含量測定試劑盒可以用于檢測紅細(xì)胞或組織內(nèi)的 ATP 水平。

二、測定原理:

肌酸激酶催化三磷酸腺苷和肌酸,生成磷酸肌酸,用磷鉬酸比色法進(jìn)行檢測。

三、試劑組成及配制:(100 管/48 樣)(本試劑盒附送雙蒸水一瓶,供客戶配試劑時(shí)使用)

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[注]:本試劑盒中 ATP3# 粉劑-20℃冷凍保存,其余試劑 4℃保存,有效期 3 個(gè)月,開封后有效期為 1 個(gè)月。

四、樣本前處理:

1、紅細(xì)胞:抗凝全血取下層壓積紅細(xì)胞,一般按 1:4 的體積比加雙蒸水進(jìn)行稀釋,再混勻使溶血,制備成溶血液。將制好的溶血液加入玻璃試管中沸水加熱煮 10分鐘,取出混勻抽提 1 分鐘,4000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 10 分鐘,取上清液待測。

2、組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織重,按重量(g):體積(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍體積的冷雙蒸水,冰水浴勻漿, 制成 10%的勻漿液(取出部分 3500 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘,取上清測定蛋白濃度),再置于沸水浴中煮 10 分鐘,取出混勻抽提 1 分鐘,3500 轉(zhuǎn)/分離心 10 分鐘,取上清液待

測。

3、培養(yǎng)細(xì)胞:先離心處理將細(xì)胞與培養(yǎng)上清分離,除去培養(yǎng)上清,得到下層沉淀細(xì)胞(一般細(xì)胞數(shù)量達(dá)到 106),將收集好的細(xì)胞加入 300~500μL 冷雙蒸水,置于冰水浴中勻漿破碎(取出部分測定蛋白濃度),后將細(xì)胞懸液于沸水浴中加熱 10 分鐘,取出混勻抽提 1 分鐘,即可用于測定。[注]:混勻抽提 1 分鐘即為漩渦混勻 1 分鐘。

五、操作步驟:

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