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產(chǎn)品分類TECHNICAL ARTICLES
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TUNLE即原位末端轉移酶標記技術。凋亡細胞的DNA雙鏈斷裂或一條鏈出現(xiàn)缺口,產(chǎn)生一系列3′-OH末端,在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)作用下,將脫氧核糖核苷酸和生物素所形成的衍生物標記到DNA的3′末端,從而進行凋亡細胞的檢測。TUNEL是分子生物學與形態(tài)學相結合的研究方法,對完整的單個凋亡細胞核或凋亡小體進行原位染色,能準確的反應細胞凋亡典型的生物化學和形態(tài)特征,可用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細胞和從組織中分離的細胞的細胞凋亡測定,并可檢測出極少量的凋亡細胞,靈敏度遠比一般的組織化學和生物化學測定法要高,因而在細胞凋亡的研究中已被廣泛采用。
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TUNEL檢測的原理:
細胞在發(fā)生凋亡時,會激活一些DNA內(nèi)切酶,這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測,可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時,暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素 (FITC) 標記的dUTP (fluorescein-dUTP) ,從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測,這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測細胞凋亡的原理。
TUNEL檢測(石蠟切片) | 取下適當?shù)男迈r的組織塊固定于4%-10%濃度的多聚甲醛或中性甲醛中,甲醛與組織塊體積比在10:1和20:1之間,4攝氏度保存運輸; |
TUNEL檢測(冰凍切片) | 取下的新鮮組織應立即放入超低溫冰箱或者液氮中,用干冰運輸,固定好的切片應于-80或者-20度保存,并盡快用于檢測; |
TUNEL檢測(細胞爬片) | 細胞爬片4%多聚甲醛4度固定30min,換PBS緩沖液4度保存運輸,盡快用于檢測; |
熒光法需要先拍一張凋亡熒光圖,再拍一張原位染核圖,再合并圖層,終我們提供的為三張熒光圖片。
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